Ⅰ. PCR 기술의 원리
올해 COVID-19 전 세계적으로 격렬 해지고 있으며 모든 사람들이 핵산 검사에 대해 들어 보았음에 틀림 없습니다. 전염병의 핵산 검출에서 PCR 형광 기술은 검사관이 COVID-19 감염되었는지 신속하고 정확하게 판단하는 데 도움이되는 중심적인 역할을합니다.
그렇다면 PCR 기술은 정확히 무엇입니까?
PCR은 Polymerase Chain Reaction의 약어입니다. 즉, PCR은 세 가지 기본 반응 단계로 구성됩니다. 고온 변성-저온 어닐링-중간 온도 확장:
1. 단일 가닥이되는 DNA의 변성
주형 DNA를 일정 기간 동안 약 95 ℃로 가열한 후, 주형 DNA의 이중 가닥은 단일 가닥으로 해리되어 프라이머에 결합하고 다음 반응 라운드를 준비 할 수 있습니다.
2. 저온 어닐링
주형 DNA를 단일 가닥으로 변성시킨 후, 온도를 약 55 ℃로 낮추고, 프라이머를 주형 DNA 단일 가닥의 상보적 서열과 쌍을 이룬다.
3. 중간 온도 확장
Taq 효소의 작용하에 DNA 주형과 프라이머 접합체는 dNTP를 반응 원료로 사용하고 표적 서열을 주형으로 사용합니다. 염기쌍 및 반예약 복제의 원리에 따라, 최종적으로 주형 DNA 사슬에 상보적인 새로운 반예약 복제 사슬을 합성한다.
Ⅱ. 형광 PCR의 검출 방법
현재 중국 국가 약국이 승인 한 COVID-19 탐지 시약의 대부분은 형광 PCR 방법을 사용하여 COVID-19 감지합니다.
형광 PCR 방법은 PCR 반응 시스템에 형광기를 첨가하는 것을 말한다. PCR 증폭의 진행에 따라, 반응 생성물은 계속 축적되고, 형광 신호 강도도 비례적으로 증가한다. 형광 증폭 곡선 그래프, PCR 형광 과정의 실시간 검출.
III. PCR 형광 소모품 선택 원리
1. 물자
PCR/qPCR 소모품은 일반적으로 시약 또는 샘플과 직접 접촉하고 폴리 프로필렌 (PP) 물질은 생물학적으로 불활성 물질이기 때문에 PCR은 일반적으로 PP 재료로 만들어집니다. 표면은 생체 분자에 부착하기 쉽지 않으며 내화학성과 온도가 우수합니다. 허용 오차 (121 ° C에서 자동 세척 될 수 있으며 열 순환 동안 온도 변화를 견딜 수 있음). PCR 소모품은 모두 PP 재료이다.
2. PCR 튜브/플레이트 볼륨
다른 볼륨의 PCR 튜브/플레이트를 선택하는 방법은 무엇입니까?
선택 목적: 특정 실험 요구 사항에 따라 적절한 제품을 선택하십시오. PCR 튜브의 부피는 대부분 PCR 반응의 요구 사항을 충족시킬 수 있습니다. PCR 튜브는 낮은 내지 중간 처리량 PCR/qPCR 실험에 이상적이며, 단일 튜브 및 스트립은 가장 일반적으로 사용되는 두 가지 형식이다.
단일 튜브는 실행 반응의 정확한 수를 설정하는 유연성을 제공합니다. 대안적으로, 단일 0.5mL 튜브가 더 큰 반응 부피를 위해 선택될 수 있다.
커플 링은 일반적으로 별도의 또는 캡이있는 8 또는 12 튜브 형식으로 제공됩니다. 낮은 처리량 및 중간 처리량 실험을 위해 단일 및 다중 채널 피펫과 호환됩니다. 캡이있는 스트립은 샘플 오염을 방지하기 위해 독립적으로 샘플 튜브를 열고 닫습니다.
3. 벽 두께
튜브 벽 두께는 열 전도도에 직접적인 영향을 미치며, 매우 얇은 벽 두께는 열 전달을 최적화하고 사이클 시간을 줄입니다. 초박형 벽 플라스틱은 표준 버전보다 약 50% 얇아서 열 장벽을 더욱 감소시켜 더 빠르고 강력한 반응을 일으 킵니다. PCR 소모품은 모두 초박형 튜브 벽입니다.
4. 색깔
PCR 플레이트는 특히 고-처리량 실험에서 샘플의 시각적 분화 및 식별을 용이하게 하기 위해 다양한 상이한 컬러 포맷으로 종종 이용 가능하다. 일반적인 PCR 반응의 경우 투명 또는 착색 된 PCR 튜브를 사용할 수 있으며 투명 PCR 튜브는 샘플 분류 관리에 더 도움이됩니다.
플라스틱의 색상은 DNA 증폭에 영향을 미치지 않지만 qPCR에는 고품질의 백색 PCR 소모품이 권장됩니다. QPCR은 형광 신호 강도의 실시간 정량적 검출을 필요로 하기 때문에, 민감하고 정확한 형광 신호 전송이 요구된다. 실험에 따르면 전통적인 투명 PCR 제품과 비교하여 백색 PCR 제품은 형광 신호를 최대한 반영하여 우주 신호의 교차 오염을 줄일 수 있으며, 실시간 형광 정량적 PCR의 결과를 얻는다.
형광 탐지기의 다른 위치 설계로 인해 다양한 브랜드의 악기는 제조업체가 권장하는 재료를 참조하십시오. Bio-Rad CFX 또는 Roche 480 실시간 PCR 기기의 경우 제조업체는 흰색 PCR 플레이트를 사용할 것을 권장합니다. PCR 플레이트는 흰색 또는 투명하고 다양한 사양을 가지고 있기 때문에 시장에서 일반적인 PCR 기기에 적합합니다.
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