항원과 항체의 결정의 차이에 따라 직접 방법, 간접 방법, 이중 항체 샌드위치 방법 (직접, 간접) 과 같은 많은 자동 ELISA 측정 모드가 있습니다. 경쟁 억제 방법 (직접, 샌드위치 등), 포획 방법 등 임상 실험실에서, 일반적으로 사용되는 ELISA 측정 모드에는 이중 항체 샌드위치 방법, 간접 방법, 이중 항원 샌드위치 방법, 경쟁 억제 방법 및 포획 방법이 포함됩니다.
항원의 결정에서, 단백질 거대분자 항원의 측정을 위해 가장 일반적으로 사용되는 방식은 이중 항체 샌드위치 방법이다. 단일 에피토프만을 갖는 소분자의 경우, 경쟁적 억제 방법이 사용된다; 항체 결정은 보통 간접적 방법, 이중 항원 샌드위치 방법, 경쟁적 억제 방법 및 포획 방법을 사용한다.
1. ELISA 워크 스테이션의 이중 항체 샌드위치 방법
다중 에피토프를 포함하는 거대 분자 단백질의 경우ELISA 워크 스테이션이중 항체 샌드위치 방법을 사용하여 매우 간단합니다. 단백질 항원을 측정하기 위한 기존의 상업적 키트는 기본적으로 모두 이 측정 모드를 채택한다.
항원의 이중 항체 샌드위치 검출을위한 최초의 완전 자동 ELISA 키트는 모두 "2 단계 방법" 을 채택했습니다. 나중에 탐지 시간을 단축하고 작업 단계를 단순화하기 위해 시약 제조업체는 점차 "한 단계" 를 도입했습니다.의료 테스트 키트.
현재 임상 실험실에서 HBsAg, 알파-페토 단백질 (α-페토 단백질, αFP), 전립선 특이 항원 (PSA), CA 시리즈 마커와 같은 거대 분자 항원의 결정, hCG와 호르몬 등은 기본적으로 한 단계 방법을 사용합니다. 2 단계 방법과 비교하여 1 단계 방법은 조작이 간단하지만 고유 한 단점이 있습니다. 잘 처리되지 않으면 이중 항체 샌드위치 면역 분석 결과는 후크 효과의 존재로 인해 거짓 음성 또는 낮은 정량적 결과가 될 것입니다.
2. ELISA 워크 스테이션의 경쟁법 테스트
디곡신, 테오필린과 같은 소분자 합텐 및 T3, T4 및 테스토스테론과 같은 다른 약물 및 호르몬은 하나의 에피토프만을 가질 수 있습니다. 또는 분자가 너무 작기 때문에 한 항체에 결합 한 후에는 입체 장애로 인해 다른 항체와 결합 할 수 없으므로 이중 항체 샌드위치 방법을 측정에 사용할 수 없습니다. ELISA 워크 스테이션은 경쟁 억제 방법 만 사용할 수 있습니다.
이 분석 모드에서, 작은 분자와 효소의 조합이 얻어질 필요가 있다. 소분자 효소 접합체의 제조는 항체 효소 접합체의 제조만큼 간단하지 않으며, 그것의 정제 또한 매우 어렵다. 소분자 결합 효소와 자유 효소의 분자량 차이는 작고, 일반적인 분자체를 사용하여 분리하기가 어렵다. 따라서 일부 사람들은 디-또는 멀티 머 소분자의 합성을 기반으로 작은 분자를 결정하기 위해 이중 항체 샌드위치 경쟁 ELISA 방법을 확립하려고합니다. 결정의 민감도 및 특이성이 개선되었다.
3. ELISA 워크 스테이션에서의 항체 결정의 간접적 인 방법
감염성 질병의 병원체 항원에 대해 신체에서 생성 된 항체를 측정하십시오.항체 테스트 키트. 고순도 및 잘 정의된 항원을 얻기 어렵기 전에, 또는 항원이 더 복잡한 경우에는, 일반적으로 간접적인 방법이 사용된다.
오늘날 C 형 간염 바이러스 항체 (항-HCV) 의 일반적으로 사용되는 임상 시험 항목은 모두 간접적 인 방법이며 간접 방법은 항체를 검출하는 데 사용됩니다. 엄밀히 말하면, 항체의 IgG 부류만이 측정되고, IgM 및 IgA 부류는 관련되지 않는다. 이는 효소-표지된 2 차 항체에 의해 결정된다. 현재, 일부 특정 IgIII 항체 검출 키트는 간접 방법을 채택한다.
4. ELISA 워크 스테이션의 이중 항원 샌드위치 방법
이중 항원 샌드위치 방법에 의해 측정된 항체는 모든 유형의 특이적 항체를 포함하고, 비특이적 IgG에 의해 간섭되지 않는다. 따라서, 항체를 검출하는 이중 항원 샌드위치 방법의 민감도 및 특이성은 간접적 방법보다 높다. 현재, 항체 결정의 민감도를 향상시키기 위해, ELISA 워크 스테이션의 키트는 기본적으로 이중 항원 샌드위치 방법을 채택했다, 항-HCV는 항원으로 인해 더 복잡합니다.
5. ELISA 워크 스테이션의 경쟁법
항체의 결정은 일반적으로 경쟁 방법을 사용하지 않는다. 항원의 불순물이 제거되기 어렵거나 항원의 결합 특이성이 불안정한 경우, ELISA 워크스테이션은 이 모드를 사용하여 항체를 결정할 수 있다. 가장 전형적인 예는 B형 간염 바이러스 코어 항체 (HBcAb) 및 B형 간염 바이러스 e 항체 (HBeAb) 의 결정이다.
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